本篇带你了解一下中压层析柱过柱时的技巧

　　中压层析柱是凝胶层析技术中的主体，一般用玻璃管或有机玻璃管。根据样品混合物中各组分在固定相和流动相中分配系数不同，从而分离的一种层析法。

　　它的直径大小不影响分离度，样品用量大，可加大柱的直径，一般制备用凝胶柱，但在加样时应将样品均匀分布于柱床面上。

　　此外，直径加大，洗脱液体体积增大，样品稀释度大。分离度取决于柱高，为分离不同组分，柱床必须有适宜的高度，分离度与柱高的平方根相关。

　　主要特点与优势

　　1.高分离效率：在中压条件下，流动相的流速加快，从而提高了分离效率，尤其适用于快速纯化需求。

　　2.良好的生物兼容性：采用医疗级聚丙烯材质，对生物样品具有良好的兼容性，减少了样品污染和损失的风险。

　　3.灵活适用性：中压层析柱可以装填免疫亲和、离子交换、凝胶过滤和反相等多种层析介质，使其能够广泛应用于抗体、蛋白和其他生物分子的纯化。

　　4.串联使用能力：多个中压层析柱可以串联使用，进一步增强纯化性能，满足更复杂的纯化需求。

　　应用领域

　　1.蛋白纯化：广泛用于抗原抗体、重组蛋白的纯化，如使用CommaX™ rProtein A, G, A/G预装柱进行抗体纯化。

　　2.核酸纯化：适用于核酸的分离和提纯，特别是对于那些需要高纯度核酸的应用。

　　3.多肽和其他分子的纯化：还可用于纯化多肽和其他小分子，如使用CommaX™ His纯化预装柱进行标记蛋白纯化。

　　下面让我们一起来了解一下中压层析柱过柱的技巧吧：

　　按过柱时的压力可以分为：加压，常压，减压。压力可以增加淋洗剂的流动速度，减少产品收集的时间，但是会减低柱子的塔板数。所以其他条件相同的时候，常压柱是效率较高的，但是时间也较长，例如一些天然化合物的分离，有时一个柱子过几个月也有可能。

　　减压柱能够减少硅胶的使用量，但是由于大量的空气通过硅胶会使溶剂挥发，有时会在柱子外面有水汽凝结，另外有些比较易分解的东西可能得不到，而且还必须同时使用水泵抽气，噪音大，时间长，所以减压过柱用得比较少。

　　加压过柱是一种比较好的方法，与常压柱类似，但用外加压力可以使淋洗剂走的快些。压力的提供可以是压缩空气，双连球或者小气泵(用鱼缸供气的加压泵就行)。特别是在容易分解的样品的分离中很适用。

　　一般压力不可过大，不然溶剂走的太快就会减低分离效果。因为加压过柱效率高，分离效果较好，所以加压过柱在普通的有机化合物的分离中是非常适用的。

　　一些低沸点溶剂装柱时往往会在柱子中产生气泡，使柱子变花，利用加压过柱法在装柱时就可以有效地解决这个问题，而且可以使柱子很快装实。

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