蛋白层析柱的特性及原理介绍

　　蛋白层析柱在蛋白，多肽，抗体等等行业中占据了重要的地位，广泛应用于制备分离的各类化合物。蛋白层析柱在原有蛋白层析分离柱的特性上还兼具了以下特性：

　　1、耐高压：允许实验过程中使用较高的流速，加快实验进程以及适合硬基质的色谱填料。

　　2、防爆性：可以选择外贴防爆膜，防止玻璃管子爆裂，对人员造成伤害。

　　3、可重复：一根柱管可多次使用，大大节约了您的成本。

　　4、可见性：分离带颜色复杂天然产物，您可以直观的看到分离色带。

　　5、筛板：可以提供各种粒径的筛板，优良的分配效果，达到更好的分离度。

　　6、优异的流体结构。

　　蛋白质层析通过利用蛋白质在流动相和固定相中分配不同的原理进行分离和纯化。 蛋白质层析技术是生物化学研究中的一个重要工具，它根据蛋白质的物理和化学特性实现高效纯化。 

　　定义：蛋白质层析是一种利用蛋白质在流动相和固定相之间不同分配原理进行分离纯化的技术。

　　原理：不同蛋白质具有不同的物理和化学特性，如分子大小、形状、电荷和疏水性等。当蛋白质溶液流经固定相时，各组分以不同强度的作用力结合在固定相上，从而实现分离。 

　　凝胶过滤层析：利用蛋白质分子的大小差异进行分离。大分子无法进入凝胶颗粒的孔隙，优先洗脱;小分子则进入孔隙，延后洗脱。

　　离子交换层析：基于蛋白质表面电荷的差异进行分离。通过改变pH或增加离子强度，使带电蛋白质与固定相的离子交换树脂可逆结合并逐一洗脱。

　　亲和层析：利用生物大分子的特异性亲和力进行分离。例如，通过基因工程引入特定标签，使目标蛋白与配基特异性结合，从而实现高效纯化。

　　疏水作用层析：通过蛋白质疏水性差异进行分离。在高盐条件下蛋白质疏水性增强，与固定相疏水配基结合，然后逐步降低盐浓度将蛋白质洗脱。

　　蛋白层析柱的工作原理

　　1. 预处理：在吸附树脂的生产过程中，一般采用的是工业级原料，产品没有经过进一步纯化处理，树脂内部残留少量单体，所以在使用之前，需用水溶性溶剂对其浸泡处理，然后用去离子水通过树脂层，置换出水溶性溶剂离子方可投入使用。

　　2. 逆流洗柱：用水洗出去水离子及破碎填料，树脂装入后，用蒸馏水反洗树脂层，直至出水清晰、无气味、无细碎树脂为止。再依次用酸碱等浸泡、冲洗树脂层，至出水呈中性为止。

　　3. 水洗：水洗的主要目的是除去层析柱上所附着的渣滓。

　　4. 吸附：吸附操作自上而下(或自下而上)通液，可采用不同流速，以选取*条件。流出液每隔一段时间取样检测，达泄漏点停止吸附，或多柱串联达饱和后解吸。吸附主要是吸取料液中的渣滓或要回收物，该过程应控制料液的速度及吸附量，大孔树脂应*浸泡在料液里，以提高吸附效果和运行稳定性。

　　5. 解吸、再生：解吸操作自上而下(或自下而上)通解吸剂，单柱吸附时，解吸与吸附操作对流为佳。解吸剂沸点要低以便回收处理。