畜禽肉中土霉素，四环素，金霉素的测定

畜禽肉中土霉素，四环素，金霉素的测定
食品安全检验手册 101 页
１.原理 样品中土霉素，四环素，金霉素经提取，用微孔滤膜过滤后进 HPLC 色谱仪测定
２.试剂和材料
⑴乙腈 色谱纯
⑵高氯酸 分析纯;
⑶高氯酸溶液 5%(V/V)
⑷土霉素标准品 纯度≥99%;
⑸土霉素标准贮备液 准确称取 10.0mg 土霉素,用甲醇配制浓度为 100μg/mL 的标准贮
备液。
⑹土霉素标准中间液: 准确吸取 5.0mL 土霉素标准贮备液,于 50mL 容量品瓶中,加水稀
释至刻度。摇匀,此液 1mL 含 10μg 氯霉素。
⑺土霉素标准系列溶液: 准确吸取土霉素标准中间液 0.1,0.2,0.5,1.0，2.0mL 分别放于
10mL 容量瓶中,然后,各加水至 10.0mL. 摇匀,即得每 mL 含 0.1, 0.2, 0.5, 1.0 .2.0μg 的土霉素
标准系列溶液。
３.仪器和设备
(1) 液相色谱仪，配有紫外吸收仪;
(2) 匀质器；
(3) 离心机：6000r/min。
４.测定步骤
（1） 提取 称取试样 5g(至 0.01g)， 置于 50mL 离心管中， 加人 25mL 高氯酸溶液：
5%(V/V), 超声提取 20min, 然后离心 10min ( 4000r/min )。取上清液，经 0.45µm 滤膜

过滤后，滤液作 HPLC 用。
（2）测定液相色谱参考条件
色谱柱:Grace Smart C 18 250mmX4.6mm, 5µm;
测定波长: 350nm
流速: 1.0mL/min;
色谱柱温度:室温。
（3）色谱测定:
① 标准曲线的制备 分别吸取土霉素标准溶液各 20µL,在上述色谱条件下,进行
HPLC 分析,以标准液浓度与峰面积进行回归分析。
② 样品测定 按上述色谱条件下,进样 20µL, 进行 HPLC 分析,根据保留时间和峰
面积，与标准比较进行定性定量。外标法定量。
５．结果计算
m
X
∨ ×
=
ρ
（1-71）
式中:
X—试样中土霉素残留量, μg/g
ρ—测定液中土霉素的含量, μg/mL
V--试样溶液的体积, mL
m-试样的质量,g。
6．土霉素，四环素，金霉素色谱图 1-78
1. 土霉素； 2.四环素；3