高压制备色谱准备工作要做哪些

 　　制备色谱简单来说，就是在化学化工医药等广泛采用的层析法以及薄层色谱。本文介绍下高压制备色谱的目的以及需要做哪些准备工作。

　　高压制备色谱的目的：

　　制备色谱的目的，是从混合物中得到纯物质。为了加快分离的时间与提高分离的效率，制备色谱的的进样品量很大，导致制备色谱柱子的分离负荷的相应加大，也就必须加大色谱柱填料，增大制备色谱的直径和长度，使用的相对多的流动相。然而，当色谱柱上样品负载加大的时候，往往导致柱效急剧下降而得不到纯的产品。制备色谱，要解决容量与柱子效果之间的矛盾，对重现性也要考虑。从经济上来说，高压制备色谱要争取少用填料，少用溶剂，要尽可能多的得到产品。

　　高压制备色谱需要做的部分准备工作：

　　1.样品的前处理：高压制备色谱柱子由于处理的样品多，比分析柱子更容易受污染，所以必要的前处理就显得非常的必要。萃取、过滤、结晶、固相萃取等简单的分离方法，如果用得上，而且还不是很麻烦，就要尽可能多的采用以去掉杂质。

　　2.固定相的选择：硅胶、键合固定相(如C18)、离子交换树脂、聚酰胺、氧化铝、凝胶等都可以作为色谱柱的填料。有不少文献报道，对填料可以进行一下处理提高了分离效果，如，对硅胶进行的硝酸银(或缓冲液)处理。

　　3.装柱方法的选择：根据固定相颗粒度和柱子的尺寸，采用不同的装柱方法，往往装填越好分离效果越好。装柱效果跟填料的颗粒度关系很大，颗粒度的减少会导致装柱的难度。一般来说，颗粒直径小于20-30um的固定相采用湿法装填。所谓“敲击-装填”技术适用于颗粒直径大于25um的固定相。

　　湿法的目的是迫使相对稀松的固定相悬浆以高速装入色谱柱子，从而减少空隙的形成。然而，当柱直径大于20mm，所加压力为30-40bar时，高压悬浆装填技术就变得十分复杂。为将小颗粒固定相装入更大得制备型色谱柱，可采用柱长压缩技术。这种方法，先将固定相悬浆(或偶尔是干填充物)装入柱中加压，利用物理方法将其压紧。

　　压紧的方法有两种：径向压缩和轴向压缩。湿法装柱需要一定的设备，在柱子填完后，应用有柱效的测量，对柱效低的柱子应该重填。

　　4.流动相的选择：除了和分析色谱同样的考虑外，在选用流动相时，要考虑色谱分离后面加有旋转蒸发等二次分离操作。一般来说，不宜采用高毒性溶剂，对多元溶剂要尽可能的少用。如果产品中含有大量溶剂，溶剂的纯度也要考虑在其中。

　　5.加样的方法：一般的进样方法有用注射器进样，用旋转阀进样，通过六通阀进样，通过主泵进样，通过辅泵进样，固体上样。

　　6.泵的选用：根据有无脉冲、能承受的zui大压力、控制的精度、售后服务等来选择泵。

　　7.检测器的选用：一般的分析池的zui大允许流速仅为5 mL/min 或者10mL/min。而专门的制备池的zui大允许流速可为150mL/min。有时，采用旁路分离管，将少量流体导入分析池进行检测，是一个不错的办法，但其浓度的误差会相对较大。

　　其他还有产品收集，分离以及柱转换等等就不再一一详述了，如果您有兴趣了解更多高压制备色谱的信息，上海宸乔生物科技有限公司。